IVD校准品开发！

1，尺度品的制备

尺度品的制备是非常复杂的问题，也是标记免疫剖析中对照难于制备的一个成分。以下商议的是实验室尺度品(或商品化试剂中尺度品)的制备。

（1）基质的制备：如前所述，作为尺度品的介质(基质)成分应与被测样品沟通。对大多数用于测定血清中某物质的尺度品，应用不含被测物质的零血清制备，以求回响的介质情况相当。但有时零值血清的制备好不容易，所以有些尺度品用适当的缓冲液制备，并在缓冲液中到场必然量的载体卵白(一样用1%～2%的牛血清白卵白)，以便使其与样品的介质情况邻近。

零值血清的制备方式有：

A、吸附法：血清中小分子物质如三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。这种方式轻便，但待测物质难以消灭清洁，并且大分子活性物质不克用此法进行制备。

B、频频冻融法：对大分子活性物质可选用低值血清，经频频冻融使被测物质失活。用这种方式可使某些卵白类激素大部门失活，但也难以获得真正的零值血清。

C、亲和层析法：用特异性抗体系备亲和层析柱，用以吸附被测抗原。用这种方式能够获得高质量的零值血清，但本法对照复杂并且成本也高。

（2）尺度物纯品的选择：应选择高化学纯和高免疫纯的纯品作尺度品。个中免疫纯尤为主要，在尺度品中不该含有与被测物质有交叉回响的物质。

（3）尺度品的制备：先用零值血清设置高浓度的尺度品，然后凭据实验系统的要求，用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度，制成相符预定要求的，由分歧浓度构成的系列尺度品。

2，尺度品的判定

（1）免疫活性的判定：选用高特异性的抗血清离别作公认尺度品(如WHO的国际参考品或国度尺度品)的待判定尺度品的剂量回响曲线，并视察两条曲线的平行性。如两条剂量回响曲线平行，解说两种物质对统一抗体有沟通的亲和力，即二者是同质性物质。如两条剂量回响曲线不屈行，解说两种物质具有异质性，因而这一待判定的尺度品是不克使用的。

（2）浓度的标定：用已判定过的，免疫活性及格的尺度品，与公认的尺度品作浓度沟通的剂量回响曲线。此时，两条剂量回响曲线应该是根基重合的。若是两者平行但不重合，则取两条剂量回响曲线的50%连系处的响应剂量( ED50 )较量二者的换算系数，然后调整待判定尺度品的浓度，直至使两条剂量回响曲线完全或根基重合为止。

3，尺度品的计量

很多小分子抗原或半抗原已能获得纯品或进行合成，它们对作为尺度品的要求能够获得根基的知足，其计量多直接用单元单子体积中的重量透露，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。比来WHO介绍用质量单元单子庖代重量单元单子，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。对大分子的活性物质则对照复杂。因为得不到绝对的纯品，故很难直接用单元单子体积中的重量或单元单子体积中的质量计量。是以，常用该物质的生物活性单元单子透露，如IU / L、mIU / L等。

4，尺度品的不乱性与留存

如前所述，为包管检测的一连可比性，每批尺度品应有相当大的量，以包管能在较长时间内使用。是以，每批尺度品应在适当的前提下留存，使其免疫活性和浓度连结不乱。

4.1 影响尺度品不乱的身分：

（1）基质中的酶、细菌污染、pH的转变、氧化、潮湿等身分都能够导致尺度品的变性，并且这些转变可因高暖和光照加快。

（2）在留存过程中发生聚合回响等分子构造的转变，可使尺度品失活。

（3）容器内壁的吸附感化和溶剂的蒸发可造成尺度品浓度的改变。

（4）留存前提不适当也能够影响尺度品的不乱性，如频频的冻融可降低尺度品的免疫活性等。

4.2 尺度品的留存方式

（1）冷冻干燥法：冷冻干燥对尺度品的浓度和免疫活性无显着的影响，是今朝最常用的留存方式。冷冻干燥成品在低温下，可在较长的时间内连结不乱。但应用冷冻干燥成品时，复溶体积的正确度十分主要。是以，要用经由校准的量器正确的复溶，以削减尺度品的浓度误差。

（2）在尺度品中加必然量的防腐剂可削减细菌污染的影响。

（3）密闭真空留存或充入惰性气体等方式也能够增加尺度品的不乱性。今朝最常用的方式是：在尺度品中到场少量的防腐剂(如0.1%叠氮钠或0.1%硫柳汞)，冷冻干燥后密封，并在低温下留存。但应注重，一旦复溶后应放低温留存，并不得频频冻溶。复溶后的尺度品其有效期显着缩短，一样不跨越6～8周，有些物质或者更短。

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