基于网络药理学分析“附子-白术”药对治疗乳腺癌骨转移的作用机制

赖 琦1 谢 丹2 刘乐玲1 邓韫洁1 叶甜婧1 

( 1 广州中医药大学第一临床医学院，广州，510000; 2 广州中医药大学第一附属医院，广州，510000)

基金项目: 杨文辉广东省名中医传承工作室建设项目( 粤中医办函［2019］5 号) 

作者简介: 赖琦( 1995. 01—) ，女，硕士研究生在读，医师，研究方向: 中医防治乳腺疾病，E-mail: 353569894@ qq. com

通信作者: 谢丹( 1976. 07—) ，女，博士，主任医师，研究生导师，研究方向: 中医防治乳腺疾病，E-mail: xie-dan@21cn. com

摘要 目的: 基于网络药理学分析“附子-白术”治疗乳腺癌骨转移的作用机制。方法: 利用中药系统药理学数据库与分析 ..( TCMSP) 数据库并结合文献筛选附子和白术的活性成分，使用 TCMSP 及 Swiss Target Prediction 数据库预测作用靶 点，通过 GeneCards 数据库收集乳腺癌骨转移的治疗靶点，绘制韦恩图获取药物疾病共同靶点，并导入 Cytoscape3. 7. 1 软 件构建“药物-成分-疾病-靶点”网络。利用 STRING 数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用( PPI) 网络，同时利用 R 软件进行 基因本体( GO) 富集分析和京都基因和基因组百科全书( KEGG) 富集分析。结果: “附子-白术”通过25 个活性成分作用于 205 个乳腺癌骨转移治疗靶点。主要通过9 种核心活性成分，作用于 AKT1、IL6、MAPK3 等 30 个核心靶点，调控雌激素、 破骨细胞分化、PI3K-AKT、HIF-1、MAPK 等信号通路，发挥治疗乳腺癌骨转移的作用。结论: “附子-白术”通过多成分、多 靶点、多通路来调控乳腺肿瘤增殖、凋亡、转移并减轻骨破坏、骨痛。

关键词  附子; 白术; 乳腺癌骨转移; 网络药理学; 中药; 靶点; 通路; 机制

Analysis of the Mechanism of“Radix Aconiti Lateralis Preparata-Rhizoma Atractylodis Macrocephalae”Medicine on Bone Metastasis of Breast Cancer Based on Network Pharmacology

LAI Qi1，XIE Dan2 ，LIU Leling1 ，DENG Yunjie1 ，YE Tianjing1

( 1 The First Clinical Medical College，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510000，China; 

2 The First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510000，China)

Abstract Objective: To analyze the mechanism of“Radix Aconiti Lateralis Preparata-Rhizoma Atractylodis Macrocephalae” treatment of breast cancer bone metastasis based on network pharmacology． Methods: TCMSP database and literature were used to screen the active ingredients of Radix Aconiti Lateralis Preparata-Rhizoma Atractylodis Macrocephalae． TCMSP and Swiss Target Prediction database were used to predict the action target，and the therapeutic target of breast cancer bone metastasis was collected through GeneCards database． Venn diagram was draw to obtain the common target of drug disease，and Cytoscape 3． 7． 1 software was constructed to construct“drug-component-disease-Target”network． The STRING database was used to construct the protein interaction network，and the R software was used for GO and KEGG enrichment analysis． Results: “Radix Aconiti Lateralis PreparataRhizoma Atractylodis Macrocephalae”acted on 205 breast cancer bone metastasis treatment targets through 25 active ingredients． It was mainly through 9 core active ingredients to act on 30 core targets such as AKT1，IL6，MAPK3，regulating signal pathways such as estrogen，osteoclast differentiation，PI3K-AKT，HIF-1，MAPK function etc． Conclusion: “Radix Aconiti Lateralis Preparata-Rhizoma Atractylodis Macrocephalae”regulates breast tumor proliferation，apoptosis，metastasis and relieves bone destruction and bone pain through multiple components，multiple targets，and multiple pathways．

Keywords Radix Aconiti Lateralis Preparata; Rhizoma Atractylodis Macrocephalae; Bone metastasis of breast cancer; Network pharmacology; Traditional Chinese medicine; Target; Pathway; Mechanism 

中图分类号: R285;     R273 文献标识码: A   

doi: 10． 3969 / j． issn． 1673 － 7202． 2021． 15． 015

乳腺癌发病率居女性恶性肿瘤的首位［1］，乳腺癌骨转移在晚期乳腺癌中的发生率为 65% ～ 75%， 而首发症状为骨转移者占 27% ～ 50%，多为多发性 溶骨性病变，常引起骨痛、骨损伤、骨相关事件影响 患者生命质量［2］，乳腺癌患者确诊骨转移后的 5 年生存率仅20%~30%［3］。目前，针对乳腺癌骨转移的治疗方法主要包括放疗、化疗、内分泌治疗、分子 靶向治疗、手术治疗、双膦酸盐治疗及镇痛等支持疗 法，但临床疗效较低，并发症发生率较高，近年来，中医药治疗乳腺癌的效果让越来越多的患者对中国传统医药有了极大的信任，并且大多数患者都积极 接受中医药治疗［4-5］。

乳腺癌骨转移在中医学属“骨痹”“骨瘤”“骨蚀”范畴。《医经精义》曰“肾藏精，精生髓，髓生骨， 故骨者肾之所合也”; 《素问·五脏生成篇》曰“肾之合骨也，其荣在发，其主脾也”; 《景岳全书》曰“脾肾 不足及虚弱失调之人，多有积聚之病”。中医认为肾为先天之本，主骨生髓，脾为后天之本，充养骨髓。相关文献对乳腺癌骨转移的中医证型分布进行统 计，毛丹等［6］证型最多; 许秋琳等［7］对110 例患者进行分析，发现阳虚寒凝 对236 例患者进行分析，发现肝肾阴虚证组合多( 38. 13% ) ，其次为脾肾阳虚证组 合( 35. 17% ) 。因此脾肾阳虚为乳腺癌骨转移发生 的重要病机，中医治法以温补脾肾为主。

附子辛、甘、大热，入心、肾、脾经，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛等功效; 白术苦、甘、温，入 脾、胃经，具有健脾益气、燥湿利水等功效。“附子白术”是补火温中的常用药对，源于白术附子汤、附 子理中丸、实脾饮、真武汤等，其中白术附子汤出自 《金匮要略》是治疗“骨痹”的代表方剂。临床研究 证实白术附子汤用于治疗乳腺癌骨转移，在减轻疼 痛、提高生命质量方面具有一定优势，还可以缓解因 口服阿片类止痛药物导致的便秘，且安全性高［8-10］.现代药理学通过动物实验表明“附子-白术”是白术 附子汤的核心药物，并且其通过减少破骨细胞的数 量并抑制其活性、下调乳腺癌骨转移组织中骨破坏 因子、减少炎症介质并上调抑炎因子等发挥作 用［11-15］。网络药理学能对药物-组成-靶点-信号通路的复杂关系进行分析，在现代药理学研究的基础上指导新药研发和药理作用研究的新兴学科［16］。“附子-白术”对乳腺癌骨转移的分子生物研究较多地停留在动物指标，因此我们采用网络药理学的方法对 “附子-白术”药对治疗乳腺癌骨转移的药理机制进 行了系统探讨，以期为该药对在临床使用及实验研 究提供参考。

1 资料与方法

1. 1 “附子-白术”药对活性成分及作用靶点的获取

在中药系统药理学数据库与分析..( TCMSP)数据库( http: / / tcmspw． com / tcmsp． php) ，分别检索 附子、白术的成分，根据药物吸收、分布、代谢及排泄 特性，将口服生物利用度( OB) ≥30% 和类药性 ( DL) ≥0. 18 作为筛选标准［17］，满足条件的作为活 性成分，并结合文献［18-19］补充药对的活性成分。利用 PubChem 数据库( http: / / pubchem． ncbi． nlm．nih． gov /) 获取活性成分的 SMILES 表达式。通过 TCMSP 可检索部分活性成分对应的靶蛋白，利用 Swiss Target Prediction 数据库( http: / /www． swisstar[1]getprediction． ch /) 检索活性成分的 SMILES 式以补 充药物的靶蛋白，将两数据库的靶点信息进行整合 去重。再将靶蛋白信息输入 Uniprot 数据库( http: / / www． uni-prot． org /) ，限定物种为“Human”，使靶蛋 白统一转换为药物作用的靶基因，即得到“附子-白 术”药对的作用靶点。

 1. 4 网络模型的构建及分析 将药物活性成分、药 物与疾病的共同靶点导入 Cytoscape3. 7. 1 软件，构 建“药物-成分-疾病-靶点”网络图，使用 Network An[1]alyzer 对“附子-白术”的主要活性成分进行分析。

 1. 5 构建蛋白质-蛋白质相互作用( PPI) 网络图 将上述药物-疾病共同靶点输入到 STRING 数据 库( http: / / string-db． org /) ，限定物种为人类，并选 取 minimum required interaction score ＞ 0. 4，获取 PPI 网络关系数据，将其导入 Cytoscape 软件，绘制 PPI 网络。

 1. 6 通路富集分析 在 R 软件安装 Bioconductor 软件包“org. Hs. eg. db”并运行，将药物与疾病共同 靶点转换成 entrezID。然后在 R 软件安装“cluster[1]Profiler”包，根据已转换的 entrezID，以 P ＜ 0. 05，Q ＜ 0. 05 分析关键靶基因的功能与信号通路即基因本 体( GO) 富集分析和京都基因和基因组百科全书 ( KEGG) 功能富集分析，并将结果以条形图形式输出。

 2 结果

2. 1 “附子-白术”活性成分及作用靶点 从 TCMSP 数据库获得附子活性成分 21 个、白术活性成分 7 个，结合文献补充纳入白术中的白术内酯( Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ) 、苍术酮、β-桉油醇、α-桉叶醇，附子中的乌头碱、 苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、宋果灵、易混翠雀花 碱、尼奥灵、苯甲酰新乌头原碱、9-去羟基森布星，最 终获得附子活性成分 29 个、白术活性成分 13 个，共 42 个。从 TCMSP 及 Swiss Target Prediction 数据库 获得附子靶点 152 个、白术靶点 176 个，去除重复靶点，得到“附子-白术”作用靶点 294 个。见图 1。

2. 2 “附子-白术”与乳腺癌骨转移的共同靶点 在 GeneCards 数据库检索乳腺癌骨转移，共获得疾病靶 点 6 786 个。输入 176 个白术靶点、152 个附子靶 点、6 786 个疾病靶点，绘制韦恩图，取交集后获得药 物-疾病共同靶点 205 个。见图 2。即“附子-白术” 治疗乳腺癌骨转移靶点。

2. 3 “药物-成分-疾病-靶点”网络的构建与分析 将“附子-白术”中 42 个潜在活性成分与 205 个 药物与疾病相同靶点导入 Cytoscape 中，获取“药物成分-靶点-疾病”网络图。见图 3。图中紫色代表药 物，蓝色代表中药复方中的 25 种活性成分( 17 个活 性成分靶点与疾病靶点无交集，给予删除) ，绿色代 表 205 个共同靶点，红色代表疾病，连线代表其相互 关联。并通过 Network Analyzer 工具分析网络中活 性成分的度值( Degree) ，度值越大说明该活性成分 与作用靶点的关联个数越多，该成分越重要。结果 显示，每个活性成分平均与 17. 84 个靶点互相作用， 度值大于 20 的活性成分有 9 个，其中 α-香树精( Al[1]pha-Amyrin) 与 53 个靶点关联，α-桉叶醇( Alpha-Eu[1]desmol) 与 50 个靶 点 关 联，准 噶 尔 乌 头 碱( Songo[1]rine) 与 42 个靶点关联，β-谷甾醇( 3S，8S，9S，10R， 13R，14S，17R) -10，13-dimethyl-17-［( 2R，5S) -5-pro[1]pan-2-yloctan-2-yl］-2，3，4，7，8，9，11，12，14，15，16， 17-dodecahydro-1H-cyclopenta［a］phenanthren-3-ol ) 与 39 个靶点关联，白术内酯Ⅱ( AtractylenolideⅡ) 与 35 个靶点关联，苯甲酰新乌头原碱( Benzoylhypaco[1]nine) 与 33 个 靶 点 关 联，8β-乙 氧 基 白 术 内 酯 Ⅲ ( 8beta-ethoxy atractylenolide Ⅲ) 与 29 个靶点关联， 白术内酯Ⅲ( Atractylenolide Ⅲ) 与 26 个靶点关联， 白术内酯Ⅰ( Atractylenolide Ⅰ) 与 21 个靶点关联， 因此这 9 种活性成分可能是该药对起到治疗乳腺癌 骨转移作用的核心成分。

 2. 4 PPI 网络与分析 将上述 205 个共同靶点输入 STRING 数据库，再导入 Cytoscape 软件分析得到 PPI 网络。见图 4。

图中圆形节点代表靶点，连线 代表靶点与靶点之间的联系，节点的大小、颜色及 其深浅变化代表 Degree 值的大小，靶点 Degree 值 越大表示该靶点与其他靶点的关联性越强，并根据Degree 值筛选出核心靶点。将 Degree 值前 30 作为 核心靶点。见图 5。图中纵坐标代表靶点，横坐标 表示 Degree 值。

2. 5 通路富集分析 205 个共同靶点经 R 语言进 行 GO 和 KEGG 富集分析，将排前 20 的结果以条形 图输出，图中 P 值代表富集的显著性，颜色越红则 显著性越高。GO 富集分析以生物学过程、细胞组 分及分子功能为主。见图 6 ～ 8。

其中，交集基因集 合共富集至 1 919 条生物学过程通路中，主要包括 调节循环系统血管管径、激活蛋白激酶等; 交集基因 集合共富集至 74 条细胞组分表达过程中，主要涉及 细胞膜的膜筏、突触膜及神经元细胞体等; 交集基因 集合共富集至 183 个与分子功能相关的过程中，主 要涵盖调控类固醇激素受体、核受体、转录因子、蛋 白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性并参与激素结合等。KEGG 功能富集共得到 130 条信号通路，前 20 的结果形成 KEGG 功能富集的条形图。见图 9。

结果显示共同靶点主要富集于肿瘤、糖尿病等多种疾 病，与乳腺癌骨转移相关的通路主要有雌激素信号 通路、破骨细胞分化、PI3K-AKT 信号通路、HIF-1 信 号通路、MAPK 信号通路等。

3 讨论 

研究证实白术附子汤对乳腺癌骨转移患者疗效确切且“附子-白术”是该方的核心药物。本研究采 用网络药理学的方法对“附子-白术”治疗乳腺癌骨 转移的活性成分、作用靶点、相关生物信号通路进行了探讨。

3. 1 “附子-白术”治疗乳腺癌骨转移核心活性成分 分析 本研究获得 25 个“附子-白术”治疗乳腺癌骨 转移的活性成分，并根据药物、成分、疾病、靶点相互 作用的网络图，计算活性成分度值，得到 9 种核心活 性成分，依次为 α-香树精、α-桉叶醇、准噶尔乌头 碱、β-谷甾醇、白术内酯Ⅱ、苯甲酰新乌头原碱、8β[1]乙氧基白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ。研究 表明，苯甲酰新乌头原碱不仅能诱导实体瘤凋亡如 胶质 瘤、胃 癌、肝 癌 等，还能促进血液肿瘤凋 亡［20-21］。准噶尔乌头碱属于 C-20 二萜型附子生物 碱，张亚平等［22］发现附子生物碱可减少小鼠乳腺癌 发生率，延长生存期，并改善体寒血瘀症状及缺血缺 氧的 指 标，降低血清中雌二醇和孕酮水平; 丁 荟 霞［23］实验发现附子生物碱有抑制人胃癌细胞株增 殖、降低侵袭力、诱导凋亡的作用并与多种化疗药物 存在协同作用，其作用机制可能与下调相关基因的 表达有关。白术发挥油是发挥抗癌作用的重要成 分，α-香树精、α-桉叶醇皆属白术挥发油类，研究表 明其可加速癌细胞凋亡，减缓癌细胞增殖，增强对肿 瘤的细胞毒性效应，抑制向正常组织侵袭转移能力 等［24］。白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、8-β[1]乙氧基白术内酯Ⅲ属于内酯类物质［25］，相关研究表 明，白术内酯类可对多种癌细胞产生抗癌作用，包括 乳腺癌 MCF7 细胞，白血病 P-388、HL-60 细胞，肝癌 HepG2 细胞，前列腺癌 Dul45 细胞，肺癌 A549 细胞， 黑 色 素 瘤 A875、B16 细 胞，大 肠 癌 Lovo 细 胞 等［26-30］。白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ可通过抑制肿瘤 坏死因子-α、一氧化氮、白细胞介素、血管内皮生长 因子和胎盘生长因子的产生发挥抗炎作用，且白术 内酯Ⅰ的作用强于白术内酯Ⅲ［31-32］。与此同时刘 昳等［33］发现白术内酯Ⅰ可以显著改善患者恶病质。鉴于此，本研究认为“附子-白术”是多种成分共同发 挥作用。其中核心成分可通过诱导肿瘤凋亡、抑制 肿瘤细胞增殖、降低肿瘤侵袭及转移能力发挥抗乳 腺癌骨转移作用，通过抗炎作用减少骨痛，并且可改 善患者生命质量。

3. 2 “附子-白术”治疗乳腺癌骨转移核心靶点分析 本研究依据 PPI 网络，得到 30 个核心靶点，其 中 前 5 位 依 次 为 AKT1、IL6、MAPK3、VEGFA、 MAPK1。AKT 有 3 个家族成员 AKT1、AKT2、AKT3，可通过 PI3K 被胞外激活，研究发现激活 AKT1 可促 进乳腺癌的增殖，但抑制 AKT1 功能会促进肿瘤迁 移能力［34-35］。炎症介质可影响恶性肿瘤骨转移，其 中白细胞介素-6( IL-6) 在诱导肿瘤细胞增殖、抑制 凋亡和刺激破骨细胞生成、抑制成骨细胞分化中具 有重要作用［36］。研究发现，乳腺癌骨转移机制是癌 细胞突破基膜侵入周围基质，进入脉管系统，在脉管 系统中成活并逃避免疫监视，并最终到达转移部 位［37］。血管内皮生长因子( VEGFA) 有助于新生血 管形成，因为肿瘤新生血管的内皮细胞之间没有密 切的连接且没有被周细胞广泛覆盖，所以形成新生 血管是癌细胞进入脉管的主要方式［38］。MAPK1、 MAPK3 是一种丝裂素活化蛋白激酶，通过组成信号 通路刺激相关因子调节参与乳腺癌的发生发展和转 移［39］。鉴于此，本研究认为“附子-白术”是多靶点 协同作用共同发挥抗乳腺癌骨转移作用。

3. 3 “附子-白术”治疗乳腺癌骨转移通路分析 本 研究通过基因 KEGG 功能富集分析，获得了雌激素 信号通路、破骨细胞分化通路、PI3K-AKT 信号通路、 HIF-1 信号通路、MAPK 信号通路等与乳腺癌骨转 移相关的通路。乳腺癌骨转移溶骨性改变是肿瘤细 胞激活破骨细胞分化通路所致，通过成骨细胞表达 RANKL 与破骨细胞前体细胞表面上的 RANK 受体 结合促进破骨细胞分化成熟; 同时，成骨细胞可通过 骨保护素 OPG 与 RANKL 竞争性结合，进而抑制 RANK-RANKL 通路［40］。肿瘤细胞可分泌 PTHrP 促 进成骨细胞表达 RANKL，并且破骨细胞破坏骨质同 时释放骨基质中的 TGF-β，TGF-β 反过来促进肿瘤 细胞 产 生 PTHrP，导致使骨质破坏的“恶 性 循 环”［41］。相关研究证实，附子白术汤和附子-白术药 对均可抑制 TGFβ 信号通路，减少 PTHrP 的表达，调 节 OPG /RANKL 系统，减轻乳腺癌骨转移裸鼠溶骨 性损伤［12-14］。亦有研究发现，雌激素信号通路可抑 制 MCF-7 细中 OPG 表达，提高 RANKL 通路活性， 从而促进破骨细胞的破骨作用［42］。PI3K /AKT 信号 通路相关蛋白磷酸化增强是乳腺癌侵袭和转移的重 要分 子 机 制 之 一［43］，并且袁 翠 堂 等［44］ 研究发 现 PI3K /AKT 信号通路参与乳腺癌骨转移大鼠骨癌痛 脊髓水平的调节。HIF-1 信号通路是乳腺癌骨转移 的重要通路，其主要通过促使肿瘤细胞适应缺氧微 环境; 激活 SNAIL1、SLUG 和 TWIST 基因，下调上皮 细胞钙黏蛋白表达，使上皮细胞向间叶细胞转化，诱 导癌细胞能动性; 促进胶原纤维的生物合成以及线 性排列，为肿瘤细胞提供迁移途径; 激活 L1CAM 蛋白，增加对于血管内皮细胞的黏附; 诱导 CXCR4 表 达，引导癌细胞附到骨组织; 有利于骨原始细胞聚集 并影响 成 骨 细 胞 与 破 骨 细 胞 的 分 化 及 活 性［45］。MAPK 通路中的 c-Jun 氨基末端激酶参与细胞应激 与凋亡，p38 激酶可调控炎症反应，细胞外信号调节 激酶有利于细胞增殖，大丝裂原活化蛋白激酶可调 节 细 胞 周 期［46］。目前研究发现阻断 ERK /P[1]38MAPK 信号通路可抑制乳腺癌骨转移［47］。鉴于此，本研究认为“附子-白术”通过抑制肿瘤细胞表达 PTHrP 和骨基质细胞释放 TGF-β，以减少成骨细胞 表达 RANKL; 并抑制雌激素信号通路，促进成骨细 胞产生 OPG，从而阻断破骨细胞分化通路的恶性循 环对骨组织的溶骨性破坏。“附子-白术”还通过抑 制 PI3K /AKT、HIF-1、MAPK 信号通路阻止肿瘤细胞 的转移，抑制 MAPK 通路调控肿瘤细胞的增殖与凋 亡，抑制 PI3K /AKT 信号通路减轻骨转移导致的 骨痛。

综上所述，本研究应用网络药理学方法，对“附 子-白术”药对的多成分、多靶点、多途径与乳腺癌骨 转移之间复杂网状关系进行研究，初步验证了“附 子-白术”药对治疗乳腺癌的基本药理学作用和相关 机制，为进一步深入临床与实验研究奠定基础。

参考文献 

［1］Global Burden of Disease Cancer Collaboration，Fitzmaurice C，Dicker D，et al． The Global Burden of Cancer 2013［J］． JAMA Oncol，2015，1 ( 4) : 505-527．

［2］中国抗癌协会乳腺癌专业..． 中国抗癌协会乳腺癌诊治指 南与规范( 2019 年版) ［J］． 中国癌症杂志，2019，29( 8) : 609-679．

［3］Xiong Z，Deng G，Huang X，et al． Bone metastasis pattern in initial metastatic breast cancer: a population-based study［J］． Cancer Manag Res，2018，10: 287-28295．

［4］Taubenberger AV． In vitro microenvironments to study breast cancer bone colonisation［J］． Adv Drug Deliv Rev，2014，79-80: 135-144．

［5］王鹏波，代云云，董涵，等． 中医药干预乳腺癌治疗的研究进展 ［J］． 中国实验方剂学杂志，2021，27( 7) : 235-243．

［6］毛丹，黄立中，冯磊，等． 乳腺癌骨转移中医证候规律调查［J］． 新 中医，2016，48( 4) : 210-214．

［7］许秋琳，陈舲，金会，等． 乳腺癌骨转移患者中医证候分布及组合 规律研究［J］． 中国中医药信息杂志，2019，26( 11) : 22-26．

［8］王鹏辉． 白术附子汤加味治疗乳腺癌骨转移的临床效果分析 ［J］． 临床医药文献( 连续型电子期刊) ，2019，6( 91) : 174，177．

［9］程旭锋，张新峰，刘琦，等． 白术附子汤加味联合唑来膦酸注射液 治疗乳腺癌骨转移临床观察［J］． 中医学报，2018，33 ( 4 ) : 533536．

［10］程旭锋，张新峰，刘琦，等． 白术附子汤加味治疗乳腺癌骨转移 临床研究［J］． 中医学报，2012，27( 3) : 270-272．

［11］刘琦，程旭锋，张新峰，等． 白术附子汤对乳腺癌骨转移裸鼠生

存时间及骨转移灶中破骨细胞的影响［J］． 中药新药与临床药理，2013，24( 5) : 441-445． 。

［12］刘琦，程旭锋，张新峰，等． 附子白术汤通过调节 OPG /RANKL 保护乳腺癌骨转移裸鼠骨损伤的研究［J］． 中国实验方剂学杂 志，2013，19( 15) : 206-210．

［13］程旭锋，张新峰，刘琦，等． 附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠 TGF-β /Smads /Gli2 /PTHrP 信号通路的影响［J］． 中国实验方剂

学杂志，2017，23( 24) : 128-132．

［14］程旭锋，张新峰，刘琦，等． 附子-白术药对对乳腺癌骨转移裸鼠 生存时间及血清中 TGF-β1、PTHrP 的影响［J］． 中成药，2018，40 ( 3) : 544-548．

［15］程旭锋，张新峰，刘琦，等． 药对“附子-白术”对裸鼠乳腺癌骨转 移 NF-κB 通路的影响［J］． 中华中医药学刊，2017，35( 11) : 3．

［16］辛卫云，白明，苗明三． 基于网络药理学的中药研究及中成药二 次开发模式探讨［J］． 中医学报，2016，31( 1) : 92-95．

［17］汝锦龙． 中药系统药理学数据库和分析..的构建和应用 ［D］． 杨凌: 西北农林科技大学，2015．

［18］陆家佳． 白术挥发性成分GC-MS 分析及对五种肿瘤细胞抑制活 性研究［J］． 海峡药学，2016，28( 6) : 28-31．

［19］杜欣韵． 基于附子甘草组效关系模型的抗肿瘤活性成分识别研 究［D］． 天津: 天津大学，2017．

［20］马凤鸣，于天启． 苯甲酰新乌头原碱对骨髓瘤细胞 RPMI8226 增 殖及凋亡的影响［J］． 四川中医，2019，37( 3) : 53-57．

［21］张霞，陈迎平． HPLC 同时测定人血浆中新乌头碱、乌头碱、次乌 头碱和苯甲酰新乌头原碱的含量［J］． 中药材，2014，37 ( 8 ) : 1407-1409．

［22］张亚平，杜钢军，孙婷，等． 附子总生物碱对乳腺癌小鼠的抗肿 瘤作用［J］． 中草药，2012，43( 10) : 1986-1990．

［23］丁荟霞． 附子生物碱对胃癌细胞株的抑制作用及其与化疗药物 协同作用的实验研究［D］． 南京: 南京中医药大学，2014．

［24］向小庆，叶红． 白术抗肿瘤作用的研究及应用进展［J］． 中国实 验方剂学杂志，2013，19( 8) : 367-370．

［25］Chen ZL． The Acetylenes from Atractylodes macrocephala［J］． Planta Med，1987，53( 5) : 493-494．

［26］Li N，Xu ZC，Zhang H，et al． New triterpene prosaponin and sapogenin with unsaturated lactone skeleton from gynostemma pentaphfllum and the antitumor activities assay［C］． Proceeding of 2008 International Conference on Ginseng，2008．

［27］Wang CC，Chen LG，Yang LL． Cytotoxic activity of sesquiterpenoids from Atractylodes ovata on leukemia cell lines［J］． Planta Med， 2002，68( 3) : 204-208．

［28］Ye Y，Chou GX，Wang H，et al． Effects of sesquiterpenes isolated from largehead atractylodes rhizome on growth，migration，and differentiation of B16 melanoma cells［J］． Integr Cancer Ther，2011，10 ( 1) : 92-100．

［29］刘志强，褚艳杰，刘静，等． 白术内酯Ⅰ通过 TLR4 /MyD88 通路 调控肺癌 A549 细胞增殖侵袭的研究［J］． 实用肿瘤学杂志， 2019，33( 3) : 228-232．

［30］张彩霞，张亚杰，江滨，等． 白术内酯Ⅱ促进大肠癌 Lovo 细胞凋 亡及对 PARP1 和 Caspase-3 表达的影响［J］． 中国实验方剂学杂 志，2017，23( 5) : 157-161．

［31］Li CQ，He LC，Jin JQ． Atractylenolide I and atractylenolide Ⅲ in-

hibit Lipopolysaccharide-induced TNF-alpha and NO production inmacrophages［J］． Phytother Res，2007，21( 4) : 347-353． ［32］Wang C，Duan H，He L． Inhibitory effect of atractylenolide I on angiogenesis in chronic inflammation in vivo and in vitro［J］． Eur J Pharmacol，2009，612( 1-3) : 143-152．

［33］刘旻，叶峰，邱根全，等． 白术内酯Ⅰ对肿瘤恶病质患者细胞因 子和肿瘤代谢因子的影响［J］． 第一军医大学学报，2005，25 ( 10) : 1308-1311．

［34］Riggio M，Perrone MC，Polo ML，et al． AKT1 and AKT2 isoforms play distinct roles during breast cancer progression through the regulation of specific downstream proteins［J］． Sci Rep，2017，7: 44244．

［35］Wang Y，Hsu JM，Kang Y，et al． Oncogenic Functions of Gli1 in Pancreatic Adenocarcinoma Are Supported by Its PRMT1-Mediated Methylation［J］． Cancer Res，2016，76( 23) : 7049-7058．

［36］Kaneshiro S，Ebina K，Shi K，et al． IL-6 negatively regulates osteoblast differentiation through the SHP2 /MEK2 and SHP2 /Akt2 pathways in vitro［J］． J Bone Miner Metab，2014，32( 4) : 378-92．

［37］林明曦，张剑． 乳腺癌骨转移分子机制的研究进展［J］． 肿瘤， 2019，39( 9) : 767-774．

［38］Waning DL，Guise TA． Molecular mechanisms of bone metastasis and associated muscle weakness［J］． Clin Cancer Res，2014，20 ( 12) : 3071-3077．

［39］吴婧，王宁菊，马吉光． MAPK 蛋白在乳腺癌中的表达及其意义［J］． 宁夏医科大学学报，2014，36( 7) : 1． ［40］Dougall WC． Molecular pathways: osteoclast-dependent and osteoclast-independent roles of the RANKL /RANK /OPG pathway in tumorigenesis and metastasis［J］． Clin Cancer Res，2012，18( 2) : 326335．

［41］Weilbaecher KN，Guise TA，McCauley LK． Cancer to bone: a fatal attraction［J］． Nat Rev Cancer，2011，11( 6) : 411-425．

［42］刘钊． 孕激素及雌激素对乳腺癌细胞 RANKL 及其受体介导的 骨转移的调节作用［D］． 南京: 南京医科大学，2011．

［43］Sun X，Ma X，Li Q，et al． Anti cancer effects of fisetin on mammary carcinoma cells via regulation of the PI3K /Akt /mTOR pathway: In vitro and in vivo studies［J］． Int J Mol Med，2018，42( 2) : 811-820．

［44］袁翠堂，丁罡，廖志军，等． 大鼠乳腺癌骨转移模型中 PI3K /Akt 信号通路参与诱导疼痛［J］． 实用癌症杂志，2016，31 ( 3) : 349352，358．

［45］邵为，林涛，仲海燕，等． 缺氧微环境对乳腺癌骨转移机制的研 究进展［J］． 医学研究杂志，2019，48( 5) : 16-19，54．

［46］吴向华，陆云飞． MAPK 信号传导通路与乳腺癌关系的研究进 展［J］． 广东医学，2010，31( 4) : 526-528．

［47］赵凯，赵茜，谭群亚，等． ERK /p-38MAPK 信号通路在乳腺癌骨

转移中的作用［J］． 浙江医学，2012，34( 21) : 1735-1738．